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蛋白含量測定

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【摘要】:
測定方法如下:?一、制作標準曲線?1、從-20℃取出1mg/mlBSA,室溫融化后,備用。?2、取18個1.5ml離心管,3個一組,分別標記為0μg,2.5μg,5.0μg,10.0μg,20.0μg,40.0μg。?3、按下表在各管中加入各種試劑。?4、混勻后,室溫放置2min。在生物分光光度計上比色分析。?二、檢測樣品蛋白含量?1、取足量的1.5ml離心管,每管加入4℃儲存的考馬斯亮藍溶液1m
測定方法如下:
 
一、制作標準曲線
 
1、從-20℃ 取出 1 mg/ml BSA,室溫融化后,備用。
 
2、取 18 個 1.5 ml 離心管,3 個一組,分別標記為 0 μg,2.5 μg,5.0 μg ,10.0 μg ,20.0 μg ,40.0 μg。
 
3、按下表在各管中加入各種試劑。
 
4、混勻后,室溫放置 2 min。在生物分光光度計上比色分析。
 
二、 檢測樣品蛋白含量
 
1、取足量的 1.5 ml 離心管,每管加入 4℃ 儲存的考馬斯亮藍溶液 1 ml。室溫放置 30 min 后即可用于測蛋白。
 
2、取一管考馬斯亮藍加 0.15mol/L NaCl 溶液 100 μl,混勻放置 2 分鐘可做為空白樣品,將空白倒入比色杯中在做好標準曲線的程序下按 blank 測空白樣品。
 
3、棄空白樣品,用無水乙醇清洗比色杯 2 次(每次 0.5 ml),再用無菌水洗一次。
 
4、取一管考馬斯亮藍加 95 μl 0.15mol/L NaCl NaCl 溶液和 5μ 待測蛋白樣品,混勻后靜置 2 min,倒入扣干的比色杯中按 sample 鍵測樣品。
 
注意:每測一個樣品都要將比色杯用無水乙醇洗 2 次,無菌水洗一次??賞被旌蝦枚喔鲅吩僖黃鴆?,這樣對測定大量的蛋白樣品可節省很多時間。測得的結果是 5 μl 樣品含的蛋白量。
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